是不是每次做微生物实验都对菌种传代次数感到困惑？为啥传代次数必须控制在5代以内？

1️⃣ 菌种传代次数为啥不能超5代？

菌种传代次数控制在5代以内，主要是为了防止菌种衰退和变异。每次传代，菌种都有可能发生自发突变，尤其是那些可能导致菌种特性衰退的突变。传代次数越多，群体中衰退型细胞数量增加并占据优势的速度就越快，导致群体表型出现衰退。比如，原本生长良好的菌株，传代过多后可能会出现生长缓慢、产酶能力下降等问题。

中国药典规定，培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代，目的就是为了防止菌株因传代次数过多而引起衰退，影响检验结果的准确性。这可不是随便规定的哦，而是经过长期实践积累得出的经验结论，结合了经验和理论依据，旨在确保菌种在研究和生产中具有稳定的遗传特性和生物活性。

2️⃣ 5代以内，菌种更稳定

控制菌种传代在5代以内，可以有效减少菌种的变异风险，保持菌种的遗传稳定性。传代次数过多，不仅会导致菌种的表型变化，还可能引发遗传突变。比如，有些菌种传代过多后，可能会出现形态结构改变、生理生化性状异常等情况，影响实验和生产的准确性和可靠性。

遵循药典规定，严格控制传代次数，不仅能确保实验结果的准确性，还能提高生产效率。使用已衰退的菌种进行生产，会影响生产效率，而把已衰退菌种作为阳性菌株进行检验，则会影响检验正确率。所以，控制传代次数在5代以内，是确保菌种稳定性和实验可靠性的关键。

3️⃣ 超过5代，风险大增

虽然并不是绝对禁止使用5代以上的菌种，但超过5代后，菌种的稳定性和可靠性会受到威胁，容易导致问题的出现。只有当经过5代传代后，菌种的形态结构、生理生化性状等仍然保持不变时，才能考虑继续使用。然而，在实验过程中，过多传代仍然是不建议的，因为这会增加变异和风险的可能性，相当于“自取其祸”。

超过5代后，菌种变异的风险会增加，可能会导致菌种的表型变化、遗传突变和污染的可能性增加。比如，原本不产孢子的菌株可能会突然开始产孢子，或者原本对某种抗生素敏感的菌株可能会变得耐药。这些变化都会影响实验和生产的准确性和可靠性。

4️⃣ 如何正确保存菌种？

为了延长菌种的保存时间，建议采用低温冷冻干燥、液氮贮存、超低温冷冻等方法保存菌种。这些方法可以有效降低菌种的代谢活动，减少变异风险，确保菌种的稳定性和纯度。比如，低温冷冻干燥法可以将菌种在极低温度下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分，结合了低温、干燥和除氧的优点，适用于大多数微生物，保藏时间可达数年甚至数十年。

标准储备菌株可用于每月或每周1次转种制备工作菌株。但需要注意的是，冷冻菌种一经解冻转种制备工作菌株后，不得重新冷冻和再次使用。因此，在进行菌种传代时，除了控制传代次数在5代以内外，还应严格遵循正确的菌种保存方法，以确保菌种的质量和稳定性。

5️⃣ 实验室操作，如何确认菌种代数？

在实际操作中，确认菌种的代数是一个重要的任务。当实验室接收到菌种时，可以将接收到的菌种作为0代，并进行形态学鉴定和生理生化特性检测，评估菌株的活力。如果鉴定结果正常且菌株没有问题，即可将此批菌株确定为F0，即母代菌种。然而，需要明确的是，这些菌株并非药典中规定的0代菌种。在实际操作中，建议实验室对接收到的菌株进行详细记录和标记，包括来源、接收时间等信息，以便追踪并确认菌株的代数。

通过严格的记录和标记以及定期进行鉴定和检测，可以更好地管理和监控菌种的代数，确保传代次数控制在规定的5代以内。这样不仅能确保实验结果的准确性，还能提高生产效率，避免因菌种变异带来的麻烦。