跑WB最怕啥？条带漂、数据崩，一查竟是内参翻车！

内参＝实验定海神针

简单说，它就是细胞里的“稳定打工人”，表达量雷打不动，专门帮你校正上样量、消除误差。没有它，半定量结果就像没秤砣的秤——全靠玄学！

三大顶流内参谁是谁

• β-actin（43 kD） 肌动蛋白，细胞骨架骨干，胞浆里到处晃，表达量大到离谱，全细胞/胞浆首选

• GAPDH（37 kD） 糖酵解劳模，几乎全身细胞24h在线，但代谢异常时会被“加戏”

• β-tubulin（55 kD） 微管扛把子，骨架另一巨头，分子量高，适合做大蛋白的“邻居”

内参选不对，条带两行泪

✅ 先看分子量——目的蛋白和内参差5 kD以上，条带才不会叠成“情侣装”
✅ 再看定位——做核蛋白还拉β-actin？核里根本没它！换PCNA（29 kD）或Histone H3（17 kD）才真香
✅ 组织有脾气——脂肪组织β-actin低到哭泣，直接换GAPDH；肌肉样本tubulin会翻车，actin反而稳

特殊样本避坑指南

• 缺氧、糖尿病 → GAPDH表达狂飙，直接pass

• 抗癌药物处理 → tubulin被药物影响，actin/GAPDH更稳

• 红细胞、分泌液 → 细胞结构都没有，常规内参全失效，得选特异性结构蛋白或分泌蛋白

抗体剁手前必看

同一只β-actin，N端抗体在心肌里直接失踪，C端抗体却能稳稳出条带！买抗体前一定看清抗原位点，别让“组织特异性”背锅

一句话总结

全细胞/胞浆→β-actin或GAPDH；核蛋白→PCNA/Histone H3；大蛋白→β-tubulin；特殊样本先查文献再下单！内参选得稳，WB才能稳！