WB条带和理论大小不一致？别慌！

1、蛋白marker有问题？

换不同品牌的marker观察有没有差异

但这种例子比较少，一般情况下marker指示位置都没问题

✅建议：备两种不同品牌marker交叉验证

2、基因存在多个转录本！

可以去NCBI查阅是否存在不同转录本

不同转录本翻译出的蛋白质大小可能有差别

抗体可能识别了另一个变体哦！

✅行动：赶紧查数据库确认！

3、翻译后修饰或剪切

糖基化、磷酸化等修饰会增大蛋白分子量

有些蛋白会形成剪切体或异构体

✅解决方案：查阅相关文献确认是否存在这种情况

4、蛋白二聚体/多聚体形成

这个和蛋白样品制备密切相关！

样品制备要点：

使用质量好且新鲜的loading buffer

样本分装冻存于-80℃

每次上样前复煮3分钟（重要！）

温度优化：

部分膜蛋白100℃煮沸会形成多聚体

建议设置温度梯度：30℃、50℃、70℃、90℃、100℃

5、蛋白相对电荷变化

正常情况下SDS中和蛋白质电荷

但有些特殊情况会影响电泳速度：

富含正电氨基酸 → SDS无法完全覆盖

富含疏水氨基酸 → 结合更多SDS，电泳加快

✅排查方法：查看蛋白氨基酸序列分析

6、一抗本身识别问题

首先翻阅一抗说明书！

对比说明书标注与实际观察的分子量

✅判断标准：

差别不大+条带特异+重复性好 = 可以接受！

如果差异过大，尝试换不同品牌一抗