蛋白纯化大作战，His-tag vs Strep-tag，选哪个？

做蛋白纯化实验，选择合适的纯化系统超重要！His-tag系统和Strep-tag系统的那些事儿，让你的实验事半功倍。

1️⃣ His-tag系统：简单又实惠的“大众选择”

His-tag系统靠的是蛋白质上的组氨酸标签和金属离子（比如镍或钴）的亲和作用来纯化蛋白质。组氨酸标签一般是6个连续的组氨酸残基，能和金属离子形成稳定的螯合物。纯化时，含His-tag的蛋白质能通过金属离子螯合树脂（像Ni-NTA或Co-NTA）捕获，然后改变缓冲液条件（比如增加咪唑浓度）来洗脱目标蛋白。

这个系统操作简单，成本低，能用在多种表达系统里，包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。而且，它还能在变性条件下纯化，这对一些难溶性蛋白来说是个大优势。不过，它也有缺点。它对某些缓冲液成分（比如螯合剂和还原剂）比较敏感，这可能会降低纯化效率。而且，它的纯化特异性相对低，可能会有一些非特异性结合的杂质蛋白不好去除。

2️⃣ Strep-tag系统：高纯度的“贵族选择”

Strep-tag系统则是基于生物素和链霉亲和素（Streptavidin）之间的超强特异性结合来纯化蛋白质的。Strep-tag是个小肽序列，和链霉亲和素的结合亲和力极高，这种结合是目前已知的最强的非共价相互作用之一。纯化时，含Strep-tag的蛋白质可以通过链霉亲和素修饰的树脂捕获，然后通过特定的缓冲液条件来洗脱目标蛋白。

这个系统的优点是纯化特异性和效率极高，在需要高纯度蛋白质的应用里表现很好。而且，它对缓冲液和洗涤条件的耐受性更强，在纯化过程中能更有效地去除杂质。它也能在多种表达系统里有效工作，包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。不过，它的成本相对高，而且在某些情况下，标签序列可能会对蛋白质的功能产生一定的影响。

3️⃣ 实际应用：选哪个系统？

在实际应用中，选His-tag系统还是Strep-tag系统得看具体的实验需求。要是实验对蛋白质纯度要求不高，成本又很重要，那His-tag系统可能是更好的选择。要是目标蛋白在变性条件下能保持活性，His-tag系统也能有效地进行纯化。

要是实验需要高纯度的蛋白质，尤其是需要去除所有杂质蛋白，那Strep-tag系统更有优势。而且，Strep-tag系统在处理一些对缓冲液条件要求严格的蛋白质时也表现不错。

4️⃣ 实验小贴士

His-tag系统：适合大肠杆菌等简单表达系统，操作简单，成本低。但要注意缓冲液成分，避免螯合剂和还原剂。

Strep-tag系统：适合需要高纯度蛋白质的实验，尤其是哺乳动物细胞等复杂表达系统。成本高，但纯化效果好。