辛辛苦苦养大的细胞，一传代就团灭？这篇直接把“细胞杀手”变“细胞奶妈”，全程高能～

传代前灵魂三问

细胞状态OK吗？ 70-90%汇合度+梭形/多边形+透亮才是传代黄金期，密度太低饿肚子，太高挤到变形

家伙什齐了吗？ 37℃预热的胰酶、PBS、新鲜培养基、无菌离心管、酒精灯统统就位，缺一都别开工

无菌氛围到位了吗？ 台面75%酒精擦三遍+紫外灯照30min+手套口罩焊脸上，别让杂菌蹭热度

六步传代法，一步一惊喜

Step1 温柔弃旧液
轻拍培养瓶让细胞松动，倾斜瓶身让废液“滑滑梯”进废液缸，动作要快姿势要帅～

Step2 PBS洗刷刷
沿壁缓慢注入PBS，轻轻晃两圈洗掉残余血清，倒掉时记得留“眼泪”别冲走细胞哦

Step3 精准加胰酶
37℃胰酶像面膜一样均匀覆盖细胞层，送回培养箱孵育1-5min，显微镜下看到细胞变圆、边缘卷起立刻终止，拖延症会害死它们！

Step4 培养基急刹车
两倍体积的新鲜培养基“哗啦”倒进去，血清瞬间中和胰酶，用移液枪温柔吹打10-15次，细胞瞬间化身“细胞雨”

Step5 离心大作战
1000rpm离心5min，上清潇洒倒掉，管底沉淀像“细胞小丸子”，轻弹管壁让它们松散开～

Step6 新家入住仪式
按1:2到1:5比例稀释到新培养瓶，轻轻摇匀让细胞“躺平”，放回37℃、5%CO₂培养箱，1-2h后补加新鲜培养基，仪式感满满

传代后72小时黄金观察期

24h 显微镜下看贴壁情况，漂着的细胞可能是消化过度or接种密度低的“小可怜”

48h 换新鲜培养基，颜色变黄说明细胞开心到代谢爆表，及时补充营养

72h 记录生长曲线和形态变化，发现异常立刻排查污染or培养条件

翻车现场急救包

细胞抱团不分散？ 吹打时力度过大or胰酶量不足，下次加个“轻柔吹打20次”buff

贴壁率低于50%？ 检查培养瓶是否包被、血清批次是否稳定，必要时上多聚赖氨酸“防滑垫”

传代后大批死亡？ 离心转速过高/时间过长是元凶，降到800rpm+3min试试“温柔离心术”